1,、器材

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿（6套一包）,，手提式高壓蒸汽菌鍋等,。2、操作步驟

1．shou先將內(nèi)層滅菌桶取出,，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

2．放回滅菌桶,，并裝入待滅菌物品,。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果,。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。

3．加蓋,，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi),。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致,，勿使漏氣,。

4．用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥,，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣,。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥,，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升,。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源,，維持壓力**所需時間,。本實(shí)驗(yàn)用1．05kg/cm2，121．3℃,，20分鐘滅菌,。

5．滅菌所需時間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣,，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降,，當(dāng)壓力表的壓力降**0時，打開排氣閥,，旋松螺栓,，打開蓋子，取出滅菌物品,。如果壓力未降到0時,，打開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降,，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口,，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。

6．將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時,，經(jīng)檢查若無雜菌生長,，即可待用,。

稀釋倒平板法

先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如1∶10、1∶100,、1∶1000,、1∶10000…），然后分別取不同稀釋液少許,，與已溶化并冷卻**45℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合,，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中,，待瓊脂凝固后,，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間即可出出菌落,。如果稀釋得當(dāng),，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的,。隨后挑取該單個菌落,，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng),。倒平板的兩種方法持皿法

⑴將若干無菌培養(yǎng)皿疊放在左側(cè),，便于拿取。

⑵點(diǎn)燃煤氣燈,，將火焰調(diào)到適中（空氣不要太大,，以免氣流過急）。

⑶倒平板時,，先用左手握住三角瓶的底部,，傾斜三角瓶，用右手旋松棉塞,，然后用右手的小指和手掌邊緣夾住棉塞并將它拔出（切勿將棉塞放在桌面上）,，隨之將瓶口周緣在火焰上過一下（不可灼燒，以防爆裂,，以殺死可指沾在瓶口外的雜菌,。然后將三角瓶從左手傳**右手中（用右手的拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部）,，在這操作過程中瓶口應(yīng)保持在離火焰2~3處,，瓶口始終向著火焰。左手拿起一套培養(yǎng)皿,，用中指,、無名指和小指托住培養(yǎng)皿底部，用食指和大拇指夾住皿蓋并開啟一縫,，恰好能讓三角瓶伸入,，隨后倒出培養(yǎng)基,。一般約倒入12ml的培養(yǎng)基即可鋪滿整個皿底。蓋上皿蓋,，置水平位置等凝,。然后再將三角瓶移**左手，瓶口再次過火并塞緊棉塞,。

平板培養(yǎng)基的冷凝方法有兩種，一種是將平板一個個攤開在桌面上冷凝,，另一方法是將幾個平板疊在一起冷凝,。前者冷凝速度較快，在室溫較高時采用,；而后者冷凝速度較慢,，可在室溫較低時采用，其優(yōu)點(diǎn)是形成冷凝水少,，尤其適用于平板劃線等的需要,。

疊皿法

此法步驟與持皿法基本相同。不同點(diǎn)是左手不必持培養(yǎng)皿,，而是將培養(yǎng)皿疊放在煤氣燈的左側(cè)并靠近火焰,，用右手拿住三角瓶的底部，左手的掌背對著瓶口,，用小指與無名指夾住瓶塞,，將其拔出，隨即使瓶口過火,，同時用左手開啟**上面的皿蓋,，倒入培養(yǎng)基，蓋上皿蓋即移**水平位置待凝,。再依次倒下面的平板,。在操作過程中，瓶口應(yīng)向著火焰保持傾斜狀,，以防空氣中微生物的污染,。