滅菌法系指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去,，從而使物品殘存活微生物的概率下降**預(yù)期的無(wú)菌保證水平的方法,。本法適用于制劑、原料,、輔料及醫(yī)療器械等物品的滅菌,。
無(wú)菌物品是指物品中不含任何活的微生物。對(duì)于任何一批滅菌物品而言,，**無(wú)菌無(wú)法保證,，也無(wú)法用試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。一批物品的無(wú)菌特性只能相對(duì)地通過(guò)物品中活微生物的概率低**某個(gè)可接受的水平來(lái)表述,，即無(wú)菌保證水平(Sterility assurance level,，簡(jiǎn)稱(chēng)SAL)。實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中,，滅菌是指將物品中污染微生物的概率下降**預(yù)期的無(wú)菌保證水平,。**終滅菌的物品微生物存活概率，即無(wú)菌保證水平不得高于10－6,。已滅菌物品達(dá)到的無(wú)菌保證水平可通過(guò)驗(yàn)證確定,。
滅菌物品的無(wú)菌保證不能依賴(lài)于**終產(chǎn)品的無(wú)菌檢驗(yàn)，而是取決于生產(chǎn)過(guò)程中采用合格的滅菌工藝,、嚴(yán)格的GMP管理和良好的無(wú)菌保證體系,。滅菌工藝的確定應(yīng)綜合考慮被滅菌物品的性質(zhì)、滅菌方法的有效性和經(jīng)濟(jì)性,、滅菌后物品的完整性和穩(wěn)定性等因素,。
滅菌程序的驗(yàn)證是無(wú)菌保證的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證后,，方可交付正式使用,。驗(yàn)證內(nèi)容包括：
(1)撰寫(xiě)驗(yàn)證方案及制定評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。
(2)確認(rèn)滅菌設(shè)備技術(shù)資料齊全,、安裝正確,，并能處于正常運(yùn)行(安裝確認(rèn))。 (3)確認(rèn)滅菌設(shè)備,、關(guān)鍵控制和記錄系統(tǒng)能在規(guī)定的參數(shù)范圍內(nèi)正常運(yùn)行(運(yùn)行確認(rèn)),。
(4)采用被滅菌物品或模擬物品按預(yù)定滅菌程序進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，確認(rèn)各關(guān)鍵工藝與參數(shù)符合預(yù)定標(biāo)準(zhǔn),，確定經(jīng)滅菌物品的無(wú)菌保證水平符合規(guī)定(性能確認(rèn)),。
(5)匯總并完善各種文件和汜錄，撰寫(xiě)驗(yàn)證報(bào)告,。
日常生產(chǎn)中,，應(yīng)對(duì)滅菌程序的運(yùn)行情況進(jìn)行監(jiān)控，確認(rèn)關(guān)鍵參數(shù)(如溫度,、壓力,、時(shí)間,、濕度、滅菌氣體濃度及吸收的輻照劑量等)均在驗(yàn)證確定的范圍內(nèi),。滅菌程序應(yīng)定期進(jìn)行再驗(yàn)證,。當(dāng)滅菌設(shè)備或程序發(fā)生變更(包括滅菌物品裝載方式和數(shù)量的改變)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證,。
物品的無(wú)菌保證與滅菌工藝,、滅菌前物品被污染的程度及污染菌的特性相關(guān)。因此,，應(yīng)根據(jù)滅菌工藝的特點(diǎn)制定滅菌物品滅菌前的微生物污染水平及污染菌的耐受限度并進(jìn)行監(jiān)控,，并在生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)采取各種措施降低污染，確保微生物污染控制在規(guī)定的限度內(nèi),。
滅菌的冷卻階段,。應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。任何情況下,，都應(yīng)要求容器及其密封系統(tǒng)確保物品在有效期內(nèi)符合無(wú)菌要求,。
滅菌方法
常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法,、輻射滅菌法,、氣體滅菌法和過(guò)濾除菌法?？筛鶕?jù)被滅菌物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌,。只要物品允許，應(yīng)盡可能選用**終滅菌法滅菌,。若物品不適合采用**終滅菌法,，可選用過(guò)濾除菌法或無(wú)菌生產(chǎn)工藝達(dá)到無(wú)菌保證要求,，只要可能,，應(yīng)對(duì)非**終滅菌的物品作補(bǔ)充性滅菌處理(如流通蒸汽滅菌)。
一,、濕熱滅菌法
本法系指將物品置于滅菌柜內(nèi)利用高壓飽和蒸汽,，過(guò)熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法,。該法滅菌能力強(qiáng)．為熱力滅菌中**有效,、應(yīng)用**廣泛的滅菌方法。藥品,、容器,、培養(yǎng)基、無(wú)菌衣,、膠塞以及其他遇高溫和潮濕不發(fā)生變化或損壞的物品,。均可采用本法滅菌,。流通蒸汽不能完全殺滅細(xì)菌孢子，一般可作為不耐熱無(wú)菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段,。
濕熱滅菌條件的選擇應(yīng)考慮滅菌物品的熱穩(wěn)定性,、熱穿透力、微生物污染程度等因素,。濕熱滅菌條件通常采用121℃×15min,、121℃×30min或116℃×40min的程序，也可采用其他溫度和時(shí)間參數(shù),，但無(wú)論采用何種滅菌溫度和時(shí)間參數(shù),，都必須證明所采用的滅菌工藝和監(jiān)控措施在正常運(yùn)行過(guò)程中能確保物品滅菌后的SAL≤10－6。當(dāng)滅菌程序的選定采用F0值概念時(shí)(F0值為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間,，系滅菌過(guò)程賦予被滅菌物品121℃下的滅菌時(shí)間),，應(yīng)采取特別措施確保被滅菌物品能得到足夠的無(wú)菌保證，此時(shí),，除對(duì)滅菌程序進(jìn)行驗(yàn)證外,，還必須在生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)微生物進(jìn)行監(jiān)控，證明污染的微生物指標(biāo)低于設(shè)定的限度,。對(duì)熱穩(wěn)定的物品,，滅菌工藝可**過(guò)度殺滅法，以保證被滅菌物品獲得足夠的無(wú)菌保證值,。熱不穩(wěn)定性物品,，其滅菌工藝的確定依賴(lài)于在一定的時(shí)間內(nèi)，一定的生產(chǎn)批次的被滅菌物品滅菌前微生物污染的水平及其耐熱性,。因此,，日常生產(chǎn)全過(guò)程應(yīng)對(duì)產(chǎn)品中污染的微生物進(jìn)行連續(xù)地、嚴(yán)格地監(jiān)控．并采取各種措施降低物品微生物污染水平,，特別是防止耐熱菌的污染,。熱不穩(wěn)定性物品的F0值一般不低干8min。
采用濕熱滅菌時(shí),，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式,，不能排列過(guò)密，以保證滅菌的有效性和均一性,。
濕熱滅菌法應(yīng)確認(rèn)滅菌柜在不同裝載時(shí)可能存在的冷點(diǎn),。當(dāng)用生物指示劑進(jìn)一步確認(rèn)滅菌效果時(shí)，應(yīng)將其置于冷點(diǎn)處,。水法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus),。
二、干熱滅菌法
本法系指將物品置于干熱滅菌柜、隧道
滅菌器等設(shè)備中,，利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法,。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌，如玻璃器具,、金屬制容器,、纖維制品、固體試藥,、液狀石蠟等均可采用本法滅菌,。 #p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
干熱火菌條件一般為160～170℃×120min以上、170～l80℃×60min以上或250℃×45min以上,，也可采用其他溫度和時(shí)間參數(shù),。無(wú)論采用何種滅菌條件，均應(yīng)保證滅菌后的物品的SAL≤10－6,。采用干熱過(guò)度殺滅后的物品一般無(wú)需進(jìn)行滅菌前污染微生物的測(cè)定,。250℃×45min的干熱滅菌也可除去無(wú)菌產(chǎn)品包裝容器及有關(guān)生產(chǎn)灌裝用具中的熱原物質(zhì)。
采州干熱滅菌時(shí),，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式,，不能排列過(guò)密，以保證滅菌的有效性和均一性,。
干熱滅菌法應(yīng)確認(rèn)滅菌柜中的溫度分布符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)及確定**冷點(diǎn)位置等,。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)是證明除熱原過(guò)程有效性的試驗(yàn),。一般將不小于1000單位的細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中,，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素**少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用的細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichia coliendoxin),。
三,、輻射滅菌法
本法系指將物品置于適宜放射源輻射的γ射線(xiàn)或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進(jìn)行電離輻射而達(dá)到殺滅微生物的方法。本法**常用的為
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Co-γ射線(xiàn)
輻射滅菌,。醫(yī)療器械,、容器、生產(chǎn)輔助用品,、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌,。
采用輻射滅菌法滅菌的無(wú)菌物品其SAL應(yīng)≤10－6,。γ射線(xiàn)輻射滅菌所控制的參數(shù)主要是輻射劑量(指滅菌物品的吸收劑量),。泫劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微生物**大數(shù)量及**強(qiáng)抗輻射力，事先應(yīng)驗(yàn)證所使用的劑量不影響被滅菌物品的安全性,、有效性及穩(wěn)定性,。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對(duì)**終產(chǎn)品,，原料藥,、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌,。滅菌前，應(yīng)對(duì)被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定,，以評(píng)價(jià)滅菌過(guò)程賦予該滅菌物品的無(wú)菌保證水平,。對(duì)于已設(shè)定的劑量，應(yīng)定期審核,，以驗(yàn)證其有效性,。
滅菌時(shí)，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控,。以充分證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi),。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計(jì)，劑量計(jì)要置于規(guī)定的部位,。在初安裝時(shí)劑量計(jì)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)源進(jìn)行校正,，并定期進(jìn)行再校正。
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Co-γ射線(xiàn)輻射滅菌法常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子(Spores of
Bacillus pumilus),。
四,、氣體滅菌法
本法系指用化學(xué)消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。常用的化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙烷,、氣態(tài)過(guò)氧化氫,、甲醛、臭氧(O3)等,，本法適用于在氣體中穩(wěn)定的物品滅菌,。采用氣體滅菌法時(shí)，應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性,、致畸性和殘留毒性,。
本法中**常用的氣體是環(huán)氧乙烷，一般與80％～90％的惰性氣體混合使用,，在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進(jìn)行,。該法可用于醫(yī)療器械，塑料制品等不能采用高溫滅菌的物品滅菌,。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜使用本法滅菌,。
采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，滅菌柜內(nèi)的溫度,、濕度,、滅菌氣體濃度、滅菌時(shí)間是影響滅菌效果的重要因數(shù),?？刹捎孟铝袦缇鷹l件：
溫度 54℃±10℃ 相對(duì)濕度 60％±10％ 滅菌壓力 8×105Pa 滅菌時(shí)間 90min
滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證。滅菌時(shí)，將滅菌腔室抽成真空,，然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定的溫濕度平衡的額定值,，再通入經(jīng)過(guò)濾和預(yù)熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過(guò)程中,，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔室的溫度,、濕度、壓力,、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)間,。必要時(shí)使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序的控制具有一定難度,，整個(gè)滅菌過(guò)程應(yīng)在技術(shù)熟練人員的監(jiān)督下進(jìn)行,。滅菌后，應(yīng)采取新鮮空氣置換,，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘留物消散,。并對(duì)滅菌物品中的環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控，以證明其不超過(guò)規(guī)定的濃度,，避免產(chǎn)生毒性,。 ·
采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，應(yīng)進(jìn)行泄漏試驗(yàn),，以確認(rèn)滅菌腔室的密閉性,。滅菌程序確認(rèn)時(shí)，還應(yīng)考慮物品包裝材料和滅菌腔室巾物品的排列方式對(duì)滅菌氣體的擴(kuò)散和滲透的影響,。生物指示劑一般采用枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis),。
五、過(guò)濾除菌法
本法系利用細(xì)菌不能通過(guò)致密具孔濾材的原理以除去氣體或液體中微生物的方法,。常用于氣體,、熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料的除菌。
除菌過(guò)濾器采用于孔徑分布均勻的微孔濾膜作過(guò)濾材料,，微孔濾膜分親水性和疏水性?xún)煞N,。濾膜材質(zhì)依過(guò)濾物品的性質(zhì)及過(guò)濾目的而定。約品牛產(chǎn)十采用的除菌濾膜孔徑一般不超過(guò)0.22μm,。過(guò)濾器的孔徑定義來(lái)自過(guò)濾器對(duì)微生物的截留,，而非平均孔徑的分布系數(shù)。所以,，用于**終除菌的過(guò)濾器必須選擇具有截流實(shí)驗(yàn)證明的除菌級(jí)過(guò)濾器,。過(guò)濾器對(duì)濾液的吸附不得影響藥品質(zhì)量，不得有纖維脫落,，禁用含石棉的過(guò)濾器,。過(guò)濾器的使用者應(yīng)了解濾液過(guò)濾過(guò)程中的析出物#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#性質(zhì)、數(shù)量并評(píng)估其毒性影響,。濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行潔凈處理,，并用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌或作在線(xiàn)滅菌。更換品種和批次應(yīng)先清洗濾器,，再更換濾芯或?yàn)V膜或直接更換濾器,。
過(guò)濾過(guò)程中無(wú)菌保證與過(guò)濾液體的初始生物負(fù)荷及過(guò)濾器的對(duì)數(shù)下降值LRV(log reduction value)有關(guān)。LRV系指規(guī)定條件下．被過(guò)濾液體過(guò)濾前的微生物數(shù)量與過(guò)濾后的微生物數(shù)量比的常用對(duì)數(shù)值,。
即： LRV=lgN0－lgN
式中 N0為產(chǎn)品除菌前的微生物數(shù)量,。 N為產(chǎn)品除菌后的微生物數(shù)量。
LRV用于表示過(guò)濾器的過(guò)濾除菌效率,，對(duì)孔徑為0.22μm的過(guò)濾器而言,，要求每1cm2有效過(guò)濾面積的LRV應(yīng)不小于7。因此過(guò)濾除菌時(shí),，被過(guò)濾產(chǎn)品總的污染量應(yīng)控 制在規(guī)定的限度內(nèi),。為保證過(guò)濾除菌效果，可使用兩個(gè)除菌級(jí)的過(guò)濾器串連過(guò)濾,，或在灌裝前用過(guò)濾器進(jìn)行再次過(guò)濾,。
在過(guò)濾除菌中，一般無(wú)法對(duì)全過(guò)程中過(guò)濾器的關(guān)鍵參數(shù)(濾膜孔徑的大小及分布,，濾膜的完整性及LRV)進(jìn)行監(jiān)控,。因此，在每一次過(guò)濾除菌前后均應(yīng)作濾器的完整性試驗(yàn),，即氣泡點(diǎn)試驗(yàn)或壓力維持試驗(yàn)或氣體擴(kuò)散流量試驗(yàn),，確認(rèn)濾膜在除菌過(guò)濾過(guò)程中的有效性和完整性。完整性的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)來(lái)自于相關(guān)細(xì)菌載留實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),。除菌過(guò)濾器的使用時(shí)間應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,，一般不應(yīng)超過(guò)一個(gè)工作日，否則應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,。
過(guò)濾除菌法常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌(Pseudomonas diminuta),。 通過(guò)過(guò)濾除菌法達(dá)到無(wú)菌的產(chǎn)品應(yīng)嚴(yán)密臨控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，應(yīng)在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行過(guò)濾操作,。相關(guān)的設(shè)備,、包裝容器、塞子及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌,，并防止再污染,。
六、無(wú)菌生產(chǎn)工藝
無(wú)菌生產(chǎn)工藝系指必須在無(wú)菌控制條件下生產(chǎn)無(wú)菌制劑的方法,，無(wú)菌分裝及無(wú)菌凍干是**常見(jiàn)的無(wú)菌生產(chǎn)工藝,。后者在工藝過(guò)程中須采用過(guò)濾除菌法,。
無(wú)菌生產(chǎn)工藝應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，并應(yīng)在無(wú)菌控制的環(huán)境下進(jìn)行過(guò)濾操作,。相關(guān)的設(shè)備,、包裝容器、塞子及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌,。并防止被再次污染,。
無(wú)菌生產(chǎn)工藝過(guò)程的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)培養(yǎng)基無(wú)菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證。在生產(chǎn)過(guò)程中,，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控生產(chǎn)環(huán)境的無(wú)菌空氣質(zhì)量,、操作人員的素質(zhì)、各物品的無(wú)菌性,。
無(wú)菌生產(chǎn)工藝應(yīng)定期進(jìn)行驗(yàn)證．包括對(duì)環(huán)境空氣過(guò)濾系統(tǒng)有效性驗(yàn)證及培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn),。
生物指示劑
生物指示劑系一類(lèi)特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能,、滅菌程序的驗(yàn)證,、生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果的監(jiān)控等。用于滅菌驗(yàn)證中的生物指示劑一般是細(xì)菌的孢子,。
1．制備生物指示劑用微生物的基本要求
不同的滅菌方法使用不同的生物指示劑,，制備生物指示劑所選用的微生物必須具備以下特性：
(1)菌種的耐受性應(yīng)大于需滅菌產(chǎn)品中所有可能污染菌的耐受性。 (2)菌種應(yīng)無(wú)致病性,。
(3)菌株應(yīng)穩(wěn)定,。存活期長(zhǎng)，易于保存,。
(4)易于培養(yǎng),。若使用休眠孢子，生物指示劑中休眠孢子含量要在90％以上,。 2．生物指示劑的制備
生物指示劑的制備應(yīng)按一定的程序進(jìn)行,，制備前，需先確定所用微生物的特性,，如D值(微生物的耐熱參數(shù),，系指一定溫度下，將微生物殺滅90％所需的時(shí)間,，以分鐘表示)等,。菌株應(yīng)用適官的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)物應(yīng)制成懸浮液,，其中孢子的數(shù)量應(yīng)占優(yōu)勢(shì),，孢子應(yīng)懸浮于無(wú)營(yíng)養(yǎng)的液體中保存。
生物指示劑中包含一定數(shù)量的一種或多種孢子,?？芍瞥啥喾N形式,。通常是將一定數(shù)量的孢子附著在惰性的載體上，如濾紙條,、玻片,、不銹鋼、塑料制品等：孢子懸浮液也可密封于安瓿中,；有的生物指示劑還配有培養(yǎng)基系統(tǒng),。D值除與滅菌條件相關(guān)外,，還與微生物存在的環(huán)境有關(guān),。因此，一定形式的生物指示劑制備完成后,，應(yīng)測(cè)定D值和孢子總數(shù),。生物指示劑應(yīng)選用合適的材料包裝，并設(shè)定有效期,。載體和包裝材料在保護(hù)生物指示劑不致污染的同時(shí),，還應(yīng)保證滅菌劑穿透并能與生物指示劑充分接觸。載體和包裝的設(shè)計(jì)·原則是便于貯存,、運(yùn)輸,、取樣、轉(zhuǎn)移接種,。
有些生物指示劑可直接將孢子接種**液體滅菌物或具有與其相似的物理和化學(xué)特性的替代品中,。使用替代品時(shí)，應(yīng)用數(shù)據(jù)證明二者的等效性,。
3．生物指示劑的應(yīng)用
在滅菌程序的驗(yàn)證中,，盡管可通過(guò)滅菌過(guò)程某些參數(shù)的監(jiān)控來(lái)評(píng)估滅菌效果，但生物指示劑的被殺滅程度,，則是評(píng)價(jià)一個(gè)滅菌程序有效性**直觀的指標(biāo),。可使用市售的標(biāo) 準(zhǔn)生物指示劑,，也可使用由日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控中分離耐受性**強(qiáng)的微生物制備的孢子,。在生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)中，需確定孢子在實(shí)際滅菌條件下的D值,，并測(cè)定孢子的純度和數(shù)量,。驗(yàn)證時(shí)，生物指示劑的微生物用量應(yīng)比日常檢出的微生物污染量大,，耐受性強(qiáng),，以保證滅菌程序有更大的安全性。在**終滅菌法中,，生物指示劑應(yīng)放任滅菌柜的不同部位,。并避免指示劑直接接觸到被滅菌物品,。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后取出，分別置培養(yǎng)基中培養(yǎng),，確定生物指示劑中的孢子是否被完全殺滅,。 #p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
過(guò)度殺滅產(chǎn)品滅菌驗(yàn)證一般不考慮微生物污染水平，可采用市售的生物指示劑,。對(duì)滅菌手段耐受性差的產(chǎn)品,，設(shè)計(jì)滅菌程序時(shí)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)計(jì)在該生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品微生物污染的水平,，選擇生物指示劑的菌種和孢子數(shù)量,。這類(lèi)產(chǎn)品的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)監(jiān)控每批滅菌前的微生物污染的數(shù)量、耐受性和滅菌程序驗(yàn)證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估,。
4．常用生物指示劑
(1)濕熱滅菌法 濕熱滅菌法**常用的牛物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，如NCTC 10007,、NCIMB 8157,、ATCC 7953),。D值為1.5～ 3.0min,，每片(或每瓶)活孢子數(shù)5×105～5×106個(gè),，在121℃,、19min下應(yīng)被完全殺滅,。此外,，還可使用生孢梭菌孢子(Spores of Clostridium sporogenes，如NCTC 8594,、NCIMB 8053、ATCC 7955),，D值為0.4～0.8min,。(2)干熱滅菌法 干熱滅菌法**常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌抱子(Spores of Bacillus subtilis，如NCIMB 8058,、ATCC 9372)。D值大于1.5min,，每片活孢子數(shù)5×105～5×106個(gè),。去熱原驗(yàn)證時(shí)使用大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichia coliendomn),，加量不小于1000細(xì)菌內(nèi)毒索單位,。
(3)輻射滅菌法 輻射滅菌法**常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus pumilus,，如NCTC 10327,、NCIMB 10692、ATCC 27142),。每片活抱子數(shù)107～108，置于放射劑量25kGy條件下,，D值約3kGy,。但應(yīng)注意滅菌物品中所負(fù)載的微生物可能比短小芽孢桿菌孢子顯示更強(qiáng)的抗輻射力。因此短小芽孢桿菌孢子可用于監(jiān)控滅菌過(guò)程,，但不能用于滅菌輻射劑量建立的依據(jù),。
(4)氣體滅菌法 環(huán)氧乙烷滅菌**常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis,，如NCTC 10073、ATCC 9372),。氣態(tài)過(guò)氧化氫滅菌**常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus steatothermophilus,，如NCTC 10007,、NCIMB 8157,、ATCC 7953)。每片活孢子數(shù)1×106～5×106個(gè),。環(huán)氧乙烷滅菌中,，枯草芽孢桿菌孢子D值大于2.5min，在環(huán)氧乙烷濃度為600mg／L,，相對(duì)濕度為60％,，溫度為54℃下滅菌，60min應(yīng)被殺滅,。
(5)過(guò)濾除菌法 過(guò)濾除菌法**常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌(Pseudomonas diminuta，如ATCC 19146),，用于濾膜孔徑為0.22μm的濾器；黏質(zhì)沙雷菌(Serratia marcescens)(ATCC 1 4756)用于濾膜孔徑為0.45μm的濾器,。
